IPS培养基是用于hPSC维持培养的无饲养层、无动物源成份的培养基。该培养基含有用于hPSC维持培养所需的最基本成份，为多能干细胞培养提供了一种更为简单的配方，下面我们来详细看看。

　　IPS培养基制备的基本方法和注意事项

　　1、IPS培养基配方的选定

　　同一种IPS培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。

　　2、IPS培养基的制备记录

　　每次制备IPS培养基均应有记录，包括IPS培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的IPS培养基一同存放、以防发生混乱。

　　3、IPS培养基成分的称取

　　IPS培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方面军做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。*称取完毕后，还应进行一次检查。

　　4、IPS培养基各成份的混合和溶化

　　IPS培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入IPS培养基中，使细菌不易生长。使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该IPS培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分*溶化，迄至煮沸。如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。

　　5、IPS培养基pH的初步调正

　　因IPS培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，IPS培养基各成分*溶解后，应进行PH的初步调正。例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握IPS培养基的最终PH，保证IPS培养基的质量。PH调整后，还应将IPS培养基煮沸数分钟，以利IPS培养基沉淀物的析出。

　　6、IPS培养基的过滤澄清

　　液体IPS培养基必须澄清，琼脂IPS培养基也应透明无显着沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体IPS培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。

　　琼脂IPS培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55~60°C的IPS培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/2，每1000mlIPS培养基加入1~2个鸡蛋的蛋白，强力振摇3~5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121°C加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。

　　7、IPS培养基的分装

　　IPS培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面IPS培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于IPS培养基的*灭菌。每批IPS培养基应另外分装20mlIPS培养基于一小玻璃瓶中，随该批IPS培养基同时灭菌，以为测定该批IPS培养基最终pH之用。

　　8、IPS培养基的灭菌

　　一般IPS培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种IPS培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。

　　某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于IPS培养基。明胶IPS培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°C左右的IPS培养基中。

　　琼脂斜面IPS培养基应在灭菌后立即取出，冷至55℃-60℃时，摆置成适当斜面，待其自然凝固。

　　9、IPS培养基的质量测试

　　每批IPS培养基制备好以后，应仔细检查一遍，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被IPS培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。

　　将全部IPS培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。

　　用有关的标准菌株接种1~2管或瓶IPS培养基，培养24~48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批IPS培养基即应弃去，不能使用。

　　10、IPS培养基的保存

　　IPS培养基应存放于冷暗处，能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板IPS培养基不宜超过3天。每批IPS培养基均必须附有该批IPS培养基制备记录副页或明显标签。